ANALÝZA KVANTITY PROTEINOVÝCH PRODUKTŮ GENU PRO TITIN U PACIENTŮ S DILATAČNÍ KARDIOMYOPATIÍ

Cíl: Molekulární mechanismy srdečního selhání (HF) u pacientů s heterozygotními protein ukončujícími (trunkujícími, tv) mutacemi v genu pro titin (TTN) nejsou dosud zcela jasné. Analýza proteinové exprese TTN je obtížná díky extrémní velikosti. Cílem bylo kvantifikovat proteinové produkty wildtype alely TTN v myokardu levé komory (LK) pacientů s pokročilým HF a kontrol.

Soubor a metodika: V IKEM jsme odebrali 41 vzorků explantovaných LK při Tx (26/41 dilatační kardiomyopatie-DCM, 15/41 kontrol, 35 mužů, průměrný věk 44±14 let) a provedli DNA sekvenaci z krve. Jednalo se o 16/26 DCM-TTNtv+ a 10/26 DCM-TTNtv- s mutací v LMNA (3x), TNNT2 (2x), FLNC, BAG3, SGCD, MYH7, PLN. Kontrolní myokard byl získán od orgánových dárců s normální funkcí LK. Pomocí westernblotu v dvoufázovém polyakrylamidovém gelu jsme zjišťovali relativní množství izoforem titinu-N2BA, N2B, Cronos normalizací na celkový a nebo sarkomerický protein (MHC).

Výsledky: Celkové množství všech izoforem titinu byl nejvyšší u kontrol, naopak nejnižší u DCM-TTNtv-. Exprese N2BA a N2B byla identická ve všech skupinách vzorků, naopak exprese T2 a Cronos byla vyšší u kontrol a nižší u DCM, bez rozdílu genotypu. Poměr N2BA/N2B, zodpovědný za diastolickou tuhost byl mezi DCM skupinami stejný.

Závěry: Exprese wt proteinových produktů TTN genu je u HF pacientů nižší než u non-HF kontrol. To naznačuje, že absence produktu protein-trunkující alely je částečně kompenzována zvýšenou expresí wt genu.
Překvapivě se ale neliší množství wt forem titinu u DCM-TTNtv+ a DCM-TTNtv-, což naznačuje, že kromě haploinsuficience se může v patogenezi uplatňovat toxický efekt trunkovaných proteinů.

Financováno: Program EXCELES, Projekt No. LX22NPO5104