Lidské embryonální kmenové buňky (hES) se mohou diferencovat
v kardiomyocyty (CMs) v in vitro podmínkách. Je známa metoda kokultivace s END2
buňkami, diferenciace cytokiny na matrigelu a působením cytokinů na kulaté shluky
buněk, Embryoid bodies (EB metoda). Výsledkem diferenciace jsou rytmicky se stahující
buňky, objevující se cca týden po zahájení diferenciačního protokolu
srovnatelné s jednotlivými typy srdečních buněk. Dosavadní studie se potýkají
s velmi nízkou výtěžností diferenciačního procesu a variabilitou dle druhu využité
linie. Cílem studie bylo vygenerovat EB metodou CMs. Dalším cílem bylo vytvoření
CMs z indukovaných pluripotentních buněk (iPS). Studie se zabývala zlepšením efektivity
procesu.
Byly použity hES linie CCTL (Brno). Dále byly využity iPS linie (po indukci buněk kožních
štěpů zdravých dobrovolníků). Diferenciace byla indukována metodou dle Keller lab
(Toronto, CAN). Úvodem byly zformovány tělíska (1500-2000 buněk). K modifikování
efektivity diferenciace byly dle časového schématu využity: Activin A, BMP4, VEGF,
FGF2 a C vit. Byla provedena modifikace protokolu a v jedné sadě bylo ponecháno
fetální bovinní sérum (FBS) pro zlepšení formace EB tělísek. Výsledky: Ode dne
12 se v sadě modifikovaného protokolu počaly objevovat rytmicky se stahující
shluky (cca 10 stahů za minutu). Maximum pulzací bylo zjištěno mezi dny 16- 20, kdy 24 z 30 počítaných přisedlých EB spontánně
pulzovalo. Ve stejném médiu byly v menší míře pozorovány i pulzující EBs původem
z iPS linie. Kontrolní sada neprokazovala žádné pulzace. Předběžné IC barvení shluků
naznačuje pozitivitu protilátek proti TroponinuT a RyR2. Ve srovnávací skupině nebyly
tyto proteiny zjištěny. Závěr: Prokázali jsme diferenciaci hES liní CCTL a vlastní
iPS linie upravenou metodou formace EBs. Kombinace cytokinů umožňuje vysokou účinnost
procesu získávání lidských srdečních buněk.