REPROGRAMMING OF MOUSE EMBRYONIC FIBROBLASTS TO CARDIOMYOCYTES | XX. výroční sjezd České kardiologické společnosti

Lidské embryonální kmenové buňky (hES) se mohou diferencovat v kardiomyocyty (CMs) v in vitro podmínkách. Je známa metoda kokultivace s END2 buňkami, diferenciace cytokiny na matrigelu a působením cytokinů na kulaté shluky buněk, Embryoid bodies (EB metoda). Výsledkem diferenciace jsou rytmicky se stahující buňky, objevující se cca týden po zahájení diferenciačního protokolu srovnatelné s jednotlivými typy srdečních buněk. Dosavadní studie se potýkají s velmi nízkou výtěžností diferenciačního procesu a variabilitou dle druhu využité linie. Cílem studie bylo vygenerovat EB metodou CMs. Dalším cílem bylo vytvoření CMs z indukovaných pluripotentních buněk (iPS). Studie se zabývala zlepšením efektivity procesu.

Byly použity hES linie CCTL (Brno). Dále byly využity iPS linie (po indukci buněk kožních štěpů zdravých dobrovolníků). Diferenciace byla indukována metodou dle Keller lab (Toronto, CAN). Úvodem byly zformovány tělíska (1500-2000 buněk). K modifikování efektivity diferenciace byly dle časového schématu využity: Activin A, BMP4, VEGF, FGF2 a C vit. Byla provedena modifikace protokolu a v jedné sadě bylo ponecháno fetální bovinní sérum (FBS) pro zlepšení formace EB tělísek. Výsledky: Ode dne 12 se v sadě modifikovaného protokolu počaly objevovat rytmicky se stahující shluky (cca 10 stahů za minutu). Maximum pulzací bylo zjištěno mezi dny 16- 20, kdy 24 z 30 počítaných přisedlých EB spontánně pulzovalo. Ve stejném médiu byly v menší míře pozorovány i pulzující EBs původem z iPS linie. Kontrolní sada neprokazovala žádné pulzace. Předběžné IC barvení shluků naznačuje pozitivitu protilátek proti TroponinuT a RyR2. Ve srovnávací skupině nebyly tyto proteiny zjištěny. Závěr: Prokázali jsme diferenciaci hES liní CCTL a vlastní iPS linie upravenou metodou formace EBs. Kombinace cytokinů umožňuje vysokou účinnost procesu získávání lidských srdečních buněk.

REPROGRAMMING OF MOUSE EMBRYONIC FIBROBLASTS TO CARDIOMYOCYTES Tématický okruh: Kardio 35 - původní sdělení
Typ: Poster - lékařský , Číslo v programu: 551


Pešl M.¹, Vrbský J.², Pešl M.³, Acimovic I.⁴, Dvořák P.², Meli A.⁵ ¹ 1. Interní kardioangiologická klinika a Biologie LFMU a ICE, ICRC, Fakultní nemocnice u sv. Anny, Brno, ² Biologický ústav, Masarykova univerzita, Lékařská fakulta, Brno, ³ Integrované centrum celulárních terpíí a regenarativní medicíny, FN u svaté Anny v Brně, Brno, ⁴ Department of Biology, Masaryk University, Faculty of Medicine, Brno, ⁵ Biologický ústav, Masarykova univerzita, Lékařská fakulta
Lidské embryonální kmenové buňky (hES) se mohou diferencovat v kardiomyocyty (CMs) v in vitro podmínkách. Je známa metoda kokultivace s END2 buňkami, diferenciace cytokiny na matrigelu a působením cytokinů na kulaté shluky buněk, Embryoid bodies (EB metoda). Výsledkem diferenciace jsou rytmicky se stahující buňky, objevující se cca týden po zahájení diferenciačního protokolu srovnatelné s jednotlivými typy srdečních buněk. Dosavadní studie se potýkají s velmi nízkou výtěžností diferenciačního procesu a variabilitou dle druhu využité linie. Cílem studie bylo vygenerovat EB metodou CMs. Dalším cílem bylo vytvoření CMs z indukovaných pluripotentních buněk (iPS). Studie se zabývala zlepšením efektivity procesu. Byly použity hES linie CCTL (Brno). Dále byly využity iPS linie (po indukci buněk kožních štěpů zdravých dobrovolníků). Diferenciace byla indukována metodou dle Keller lab (Toronto, CAN). Úvodem byly zformovány tělíska (1500-2000 buněk). K modifikování efektivity diferenciace byly dle časového schématu využity: Activin A, BMP4, VEGF, FGF2 a C vit. Byla provedena modifikace protokolu a v jedné sadě bylo ponecháno fetální bovinní sérum (FBS) pro zlepšení formace EB tělísek. Výsledky: Ode dne 12 se v sadě modifikovaného protokolu počaly objevovat rytmicky se stahující shluky (cca 10 stahů za minutu). Maximum pulzací bylo zjištěno mezi dny 16- 20, kdy 24 z 30 počítaných přisedlých EB spontánně pulzovalo. Ve stejném médiu byly v menší míře pozorovány i pulzující EBs původem z iPS linie. Kontrolní sada neprokazovala žádné pulzace. Předběžné IC barvení shluků naznačuje pozitivitu protilátek proti TroponinuT a RyR2. Ve srovnávací skupině nebyly tyto proteiny zjištěny. Závěr: Prokázali jsme diferenciaci hES liní CCTL a vlastní iPS linie upravenou metodou formace EBs. Kombinace cytokinů umožňuje vysokou účinnost procesu získávání lidských srdečních buněk.

PROHLÍŽENÍ ABSTRAKTA